蒋翊武于1884年12月21日出生在湖南澧州（今澧县），家境贫寒，是家中的长子。为了培养他，父亲节衣缩食，将他送到私塾读书，而他的四个弟弟则选择去做学徒。1890年，蒋翊武进入澧兰书屋学习，师从周宣生和晏开甲，开始了他的启蒙教育。 1898年，蒋翊武与同乡学友杨载雄、黄贞元等人一起转学到安福（今临澧县）的梅溪桥私塾，师从蒋作霖，并开始接触维新思想。他积极参与宣传改革时事，并因为戊戌变法的失败而未能考入长沙时务学堂。到了1900年，他继续在梅溪桥求学，而杨载雄则加入了湘军的“劲字营”。

1902年，正值清朝最后一次科举考试，蒋翊武的族兄蒋念堂考取了秀才。蒋翊武对此表现出轻蔑的态度，直言：“奴隶功名，要它何用？”他早已心生反清排满的思想，抨击科举制度，表达了自己对满清政权的愤恨。 1903年，蒋翊武进入澧州高等小学堂（今澧县第一中学），第二年以第一名的成绩考入了常德的湖南西路师范学堂。此时，革命思潮已在湘西北地区蔓延，他也开始接触和学习资产阶级民族主义和民主主义思想，并阅读了清政府查禁的《扬州十日记》《嘉定屠城记》《黄帝魂》等书籍。

1904年秋，华兴会联合武昌的科学补习所准备发动起义，蒋翊武协助宋教仁组织革命力量，并准备响应长沙的起义。然而，由于起义准备工作不严密，清政府对革命人士展开大规模搜捕，蒋翊武被开除学籍，只能回到家乡避难。 1905年冬，蒋翊武前往上海准备留学日本，但由于日本政府对中国留学生的歧视，许多留学生纷纷回国，蒋翊武只好留在上海。第二年春，归国的学生们在吴淞开设了中国公学，蒋翊武便进入这所学校，结识了许多革命党人，革命思想也更加成熟。他与同学们组织了竞业学会，并在刘复基的介绍下加入了中国同盟会。10月28日，蒋翊武与杨卓霖共同创办了《竞业旬报》，通过白话文宣传革命思想。1907年春，《竞业旬报》被迫停刊，蒋翊武只好返回家乡。

1909年春，蒋翊武再次前往上海，几个月后，刘复基前往汉口协助詹大悲接办《商务报》，蒋翊武也随之去了汉口，成为《商务报》的编辑。汉口的革命活动非常活跃，不少革命人士潜伏在新军中，秘密组织革命团体，蒋翊武与他们紧密联系。通过新军成员，蒋翊武得知了群治学社的活动，决定加入，并以记者身份去鄂西采访。途中，在天门决定从军，投奔第二十一混成协四十一标三营。尽管群治学社遭遇了挫折，但在1910年1月30日，群治学社改组为振武学社，蒋翊武被推为社长。 1911年3月15日，振武学社改名为“文学社”，并在武昌小东门召开了成立大会，蒋翊武被推举为社长。文学社成立后，积极发展成员，尤其在新军中，迅速扩大组织力量。很快，新军的各个标营几乎都有文学社的成员。到1911年9月24日，文学社与湖北的另一个革命团体“共进会”在武昌胭脂巷举行联席会议，会上推举刘复基为军政府总理，蒋翊武为革命军临时总指挥。起义的准备工作由两大革命团体联合领导。

然而，1911年10月9日，起义计划泄露，汉口机关部失事，党人名册和印信被查抄，局势变得十分危急。蒋翊武赶回武昌后，立即决定发动起义。起义总指挥部被破获，刘复基、彭楚藩等人被捕，而蒋翊武趁机逃离，潜匿在新沟（今监利）等待时机。 10月10日，武昌起义爆发，全城光复。12日，蒋翊武赶回武昌，成为湖北军政府军事顾问兼联络使，奔走于武昌和汉口之间，提议扩充军队并组建义勇军，保卫汉口和汉阳。此后，蒋翊武被任命为湖北军政府军务部副部长。11月27日，汉阳失守，蒋翊武被推为战时总司令部监军，随后接任护理总司令，负责指挥战局。1911年12月6日，清政府与革命军停战，蒋翊武辞去总司令职务，仍以招抚使名义驻守汉口。

1912年，袁世凯窃取了中华民国临时大总统一职，并于6月邀请蒋翊武赴北京担任临时大总统府高等军事顾问。临行前，蒋翊武召开了文学社的最后一次社员大会，决定全体加入中国同盟会。尽管袁世凯为蒋翊武授予勋位和陆军中将的职衔，但蒋翊武婉拒了这一切，采取了不合作的态度。 1912年8月25日，国民党成立，蒋翊武与阎锡山、张继、李烈钧等人被推举为参议，并担任汉口交通部部长，负责两湖及陕西三省的党务。蒋翊武赞成宋教仁的政治主张，支持限制袁世凯的权力，防止独裁政权的出现。12月，他主办了《民心报》，与《中华民国公报》展开对抗。1913年2月，蒋翊武奉宋教仁之命，前往上海、武汉一带游说，争取人民支持。然而，3月20日，宋教仁在上海被刺，蒋翊武认识到仅靠议会和政党内阁无法阻止袁世凯的独裁统治，决定支持孙中山通过武力讨袁，随后回到湖南。

1913年7月，国民党发动了二次革命，蒋翊武被任命为鄂豫招抚使，派往岳阳部署军队。尽管湖南都督谭延闿名义上支持国民党，但并未积极准备军事行动，蒋翊武的计划未能实现。8月6日，蒋翊武遭袁世凯通缉，湖南宣布取消独立，蒋翊武回到长沙，最终与其他革命党人逃离湖南，决定前往广西。 1913年8月29日，蒋翊武在广西兴安县被捕，并被押解到桂林。9月1日，他在狱中写下了对袁世凯罪行的控诉，并作下遗书。9月9日，蒋翊武在丽泽门外刑场就义，年仅28岁。他从容坐上红毯，向围观群众讲述革命大义。 蒋翊武的遗体后来被归葬于长沙岳麓山。他为中国的民主革命做出了巨大贡献，积极宣传民主思想，参与创办《竞业旬报》《商务报》《大江报》《民心报》等媒体，提倡“大乱”，掀起了革命高潮；他推动新军的革命运动，准备通过武装手段实现政权更替。他一生坚定支持孙中山，致力于推翻满清政权，建立民国，誓死捍卫民主与共和。